Маршрут тролейбуса №40 пролягає через основні зупинки: Харківська, вул. Руданського, Вирлиця, вул. Декабристів, Бориспільська, вул. М. Бойченка, вул. Залізнична (Дніпровський), Видубичі та інші вузлові точки міста. Повний перелік зупинок по порядку: Харківська → вул. Руданського → Вирлиця → вул. Декабристів → Бориспільська → вул. М. Бойченка → вул. Залізнична (Дніпровський) → Видубичі → вул. Стаханівська → Дружби народів → вул. Кіото → Теличка → вул. Краснозоряна → Кловська → вул. Шовковична → вул. Саперне Поле → Деміївська.

Маршрут має зручні пересадки на метро: Харківська, Вирлиця, Бориспільська, Видубичі, Дружби народів, Кловська, Деміївська. Час роботи тролейбуса №40: 05:30–23:00. Інтервал руху в години пік — 12 хвилин, в інший час — 18 хвилин.

Вартість проїзду в тролейбусі №40 відповідає єдиному тарифу міського транспорту Києва — 8 грн. Оплатити проїзд можна готівкою водієві або за допомогою безконтактної картки «Київ» (Kyiv Smart Card). Картка «Київ» приймається на всіх маршрутах міського транспорту та є найзручнішим способом оплати.

Актуальний розклад руху тролейбуса №40 та відстеження транспорту в режимі реального часу доступні в застосунках Kyiv Smart City та Moovit. У Google Maps можна побудувати маршрут з урахуванням пересадок на метро, автобуси та тролейбуси.

Маршрут тролейбуса №40 має важливе значення для мобільності мешканців районів Дарницький, Дніпровський, Голосіївський. Він забезпечує зручне сполучення між спальними районами та центральними вулицями міста, а також під'їзд до станцій метро.

Для зручності пасажирів на зупинках маршруту тролейбуса №40 розміщені розклади руху. Під час пікового навантаження (ранок 07:00–09:30, вечір 16:30–19:30) рекомендується враховувати можливі затримки через інтенсивний трафік.

Маршрут обслуговується Київпасстрансом — комунальним підприємством, що відповідає за наземний громадський транспорт столиці. Парк транспортних засобів регулярно оновлюється сучасними автобусами та тролейбусами з кондиціонуванням та системою оголошення зупинок.